人胚肺二倍體細胞系 KMB-17細胞系

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人胚肺二倍體細胞系 KMB-17細胞系，細胞凋亡從線蟲到人類都高度保守，當細胞接收到凋亡信號后，通過一系列精細調控和傳遞后，下游的凋亡執行者caspase家族蛋白（CED-3是其中一員）被激活從而誘導凋亡的發生。施一公教授領導的實驗室十五年來一直致力于對細胞凋亡調控機理的研究。但是這條通路上caspase蛋白被激活的具體機制至今仍不清晰。2010年施一公實驗室解析了CED-4細胞凋亡小體八聚體的晶體結構，是對CED-4介導的CED-3激活機制研究的重要突破，但是CED-3與CED-4的相互作用界面及機制仍然有待揭示。

人胚肺二倍體細胞系 KMB-17細胞系，，血清是細胞培養液中*重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養成分。常見問題解答：

1、有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經過正確處理的熱滅**清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或完全沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點"，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量!

2、細胞培養中出現黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，首先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括**污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質量不好，反復凍融的結果;

(3)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長;

(4)配制培養基的水質、容器不合格?？蓱秒x心、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

3、 細胞培養中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數。

(2) 培養基無需37℃水浴。

(3) 培養基保持*佳PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴格控制配制培養基的水質，容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的*佳時機，細胞切勿生長過老。

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本人做銷售6年多了，已經賣了將近3萬多瓶的血清了，囊括：Gibco胎牛血清、Hyclone胎牛血清、德國SERANA胎牛血清、活性炭處理血清、超低IgG血清、透析胎牛血清、熱滅**清等，有很多老師收到血清使用時發現有沉淀想象，像頭皮屑有的甚者在纖維鏡下看到像成團棉花一樣，因此懷疑產品的質量問題，其實這是沒有根據的。它是由纖維蛋白的凝聚產生，對血清質量沒有任何影響，沉淀的產生原因很多，和廠家的加工生產方式密切相關。國產的血清，大多來自北方，由于價格低廉，保存環境都不好，從采血、冷凍、運輸到生產會經過多次凍融，每次凍融過程，就會析出部分纖維蛋白沉淀，這樣，血清成品過濾后看起來反而更加的“干凈”，很少有沉淀產生。而進口的胎牛血清，過濾分裝前很少會反復凍融，生產后的成品也是清澈的，但隨著時間的推移，血清中的大量纖維蛋白會析出形成沉淀。當然，進口的新生牛血清，一般牛齡都在2周左右，血清中的各種蛋白含量明顯偏高，生產后血清可能會渾濁，甚至有大量沉淀。當然，購買回來的血清都是冰凍狀態，使用時需要融化，融化過程*好在溫度較低的狀態下慢慢進行，否則沉淀相對較多，雖然沉淀并不直接影響血清的質量，但對細胞的顯微觀察有一定的阻礙。那如何去除這些絮狀沉淀呢，我司王技術總結歸納了血清沉淀融化“三步曲”，希望能幫到您。

**步：室溫90min或者15-20°C水浴18min。

**步：20°C水浴25min。

第三步：37°C水浴35min。

    如果內有頭皮屑絮狀沉淀，說明脂蛋白和纖連蛋白析出，不會影響細胞培養狀態。

假設細胞培養每代傳代時間超過正常傳代時間，有可能細胞培養過程中受到了污染或致電技術咨詢。

關鍵詞：胎牛血清；進口胎牛血清；沉淀；析出；細胞污染；絮狀

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